產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Cell Counting Kit-8，簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒或CCK8試劑盒，是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測(cè)的試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

※使用水溶性四唑鹽與水溶性甲臜染料，因此無需DMSO換液操作步驟。

※與其他水溶性四唑鹽法（XTT，MTS）相比，靈敏度更高的同時(shí)毒性更低

※方便：?jiǎn)我蝗芤簾o需其他試劑

※酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無明顯影響

儲(chǔ)存和穩(wěn)定性:

4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。

試劑盒組成:

注意事項(xiàng)：

※本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶的催化反應(yīng)，因此當(dāng)檢測(cè)體系中有還原性物質(zhì)存在時(shí)，會(huì)干擾測(cè)定。

※由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)問題。

※用酶標(biāo)儀檢測(cè)之前，要確保每個(gè)孔內(nèi)沒有氣泡，否則會(huì)影響測(cè)定。

※加入 CCK-8 試劑后，培養(yǎng)時(shí)間要根據(jù)不同的細(xì)胞種類、數(shù)量和細(xì)胞狀態(tài)來確定。通常情況下， 相同的培養(yǎng)時(shí)間，懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞相比，吸光度較低，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間或者增加細(xì)胞數(shù) 量。此外，白細(xì)胞可能也需要較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間。

※本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

※為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1.       使用與酶標(biāo)儀相匹配的 96 孔培養(yǎng)板。通常進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)時(shí)，每孔加 100 微升 2000 個(gè)細(xì)胞，而測(cè)定細(xì)胞毒性時(shí)，每孔加100微升5000個(gè)細(xì)胞，應(yīng)根據(jù)所用的細(xì)胞類型、增殖速度進(jìn)行調(diào)整。注意設(shè)置 2-3個(gè)重復(fù)孔，并按照實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，按要求進(jìn)行培養(yǎng)并給予特定的藥物刺激。

2.       處理結(jié)束后，向每孔加入 10μl CCK-8試劑（如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液）。可以用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。

3.       37 oC培養(yǎng)箱內(nèi)孵育0.5-4小時(shí)，培養(yǎng)時(shí)間的長(zhǎng)短依據(jù)細(xì)胞種類、數(shù)量、活力等情況而定，大多數(shù)情況孵育1小時(shí)即可。初次實(shí)驗(yàn)者，可以選擇幾個(gè)不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)如 0.5h, 1h, 2h, 4h 用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，以便選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4.       在 450nm 測(cè)定OD吸光度并進(jìn)行計(jì)算。如無 450nm 濾光片可用 430-490nm 范圍內(nèi)的濾光片。注意：若樣品為渾濁的細(xì)胞懸液時(shí)，可以選用大于 600nm 的波長(zhǎng)，如 650nm 作為參比波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。 注意：用酶標(biāo)儀檢測(cè)之前，要確保每個(gè)孔內(nèi)沒有氣泡，否則會(huì)影響測(cè)定。

5.       結(jié)果判斷：細(xì)胞增殖或毒性＝100％ × (OD_{實(shí)驗(yàn)}－OD_空白) / (OD_對(duì)照－OD_空白)

OD_{實(shí)驗(yàn)}：實(shí)驗(yàn)孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8、待測(cè)物質(zhì))

OD_空白：空白孔(不含細(xì)胞和待測(cè)物質(zhì)的培養(yǎng)基、CCK-8)

OD_對(duì)照：對(duì)照孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8、沒有待測(cè)物質(zhì))