品簡(jiǎn)介

本試劑盒是專門用于從血漿、全血、無(wú)細(xì)胞體液、病毒原液和感染病毒的組織中提取游離DNA的試劑盒。循環(huán) DNA 是指游離在細(xì)胞外的 DNA，它是細(xì)胞調(diào)亡產(chǎn)生的。循環(huán) DNA 片斷一般在 1KB 以下。試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù)，提取過(guò)程中無(wú)需使用有毒的酚

氯仿抽提，也無(wú)需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀。得到的循環(huán) DNA 可直接用于定量 PCR，液相或固

相芯片分析，雜交和 SNP 檢測(cè)等分析。

試劑盒組成

   *Protease K含有50%甘油，吸取時(shí)，移液器不能伸得太入，以免吸頭外壁帶走Protease K

儲(chǔ)存和穩(wěn)定性

在購(gòu)買后按以下方式儲(chǔ)存可保存至少12個(gè)月；Protease K儲(chǔ)于-20℃，其它組成儲(chǔ)于室溫（22-25℃）。Buffer BL在低溫下可能會(huì)出現(xiàn)沉淀，加熱到37℃溶解沉淀。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀該手冊(cè)并熟悉各個(gè)步驟，在開始之前準(zhǔn)備好所有的試劑盒組分和必需的器材。

操作步驟

以下操作以1000μl 液體樣品為例，更大的樣品處理量，請(qǐng)將試劑按比例增加。更多的試劑需另外購(gòu)買。

1.取1000μl 血清、血漿或者其他無(wú)細(xì)胞液體樣品置于2ml離心管中。

2.加入1000μl Buffer BL 、20μl Protease K，最高速度渦旋15秒充分混勻。

3.65℃水浴10分鐘。孵育過(guò)程中短暫渦旋管子一次。

4. 加入1000ul無(wú)水乙醇（96-100%，室溫）至裂解液中，最高速度渦旋20秒混勻。將柱子稍微離心以收集蓋子上的液滴。

5. 把GBC吸附柱裝在在2ml收集管中（已提供），取第4步得到的溶液700μl轉(zhuǎn)入柱中，10,000×g離心30秒，倒棄流出液重新套上收集管。

6.重復(fù)第五步，直至第四步的所有溶液過(guò)柱完畢。

溫馨提示：第五、六步建議用真空泵替代離心操作，濾過(guò)更快。

7.加入500μl Buffer WB至柱子中，10,000×g離心30秒，棄去流出液。

注意：Buffer WB使用前須按要求用無(wú)水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。

8. 將GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g離心1min,倒棄流出液；

注意：DNA Wash Buffer使用前須要用無(wú)水乙醇稀釋。如果放入冰箱中，使用前須恢復(fù)到室溫。

9.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g離心1min,棄去流出液；

10. 將GBC吸附柱重新套回2ml收集管中，最大轉(zhuǎn)速（>13.000×g）離心空結(jié)合柱1min以干燥柱子的基質(zhì)；這一步對(duì)下面的洗脫步驟至關(guān)重要。

11. 將柱子置于1.5ml滅菌離心管，加入50-100μl TE或滅菌去離子水至柱子的膜中央，室溫靜置于2min；

12. 室溫下，離心(>13.000)1min，以洗脫DNA。保留含DNA流出液。將DNA儲(chǔ)于-20℃。

注意：為增加得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，1,2000rpm離心2分鐘。