使用說明：

1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：

1.1．對(duì)于6孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升4%多聚甲醛固定液，室溫固定15分鐘。對(duì)于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。

1.2．吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。

1.3．吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器，不能使用聚苯乙烯(polystyrene)容器配制染色工作液。染色工作液按下表比列配制：

說明：對(duì)于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡(jiǎn)單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌； 而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會(huì)嚴(yán)重變形。配制染色工作液時(shí)，可能有少量絮狀沉淀出現(xiàn)，震蕩混勻后就會(huì)完全溶解，且需要待溶解完全后才能使用。

1.4．37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

1.5．普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。

2. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：

2.1. 離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi)，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升4%多聚甲醛固定液，室溫固定15分鐘。固定時(shí)可以在搖床上緩慢搖動(dòng)，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。

2.2. 離心，吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。

2.3. 離心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考上表。

2.4. 37℃孵育過夜。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

2.5. 取部分染色后的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以離心，去除染色工作液，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。如果離心，取細(xì)胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。

3. 對(duì)于組織切片：

3.1. 對(duì)于石蠟切片先按照常規(guī)方法進(jìn)行脫蠟和水化處理。對(duì)于冷凍切片直接按照以下步驟進(jìn)行。

3.2. 加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15分鐘。

3.3. 用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。

3.4. 吸除PBS，加入適當(dāng)量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

3.5. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā)。最好把整個(gè)切片浸泡在染色工作液中。

注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。